1、洗涤液配制：用蒸馏水或纯化水将浓缩洗涤液（2号液）按1:20稀释
2、稀释样本：用样本稀释液（5号液）将样本血清按1:100稀释，充分混匀。
3、加样：分别加入已稀释样本血清和阴、阳性对照各100ul于相应孔中，设空白对照孔（加100ul样本稀释液）。置37度避光反应30分钟。
4、洗板：用洗板机洗涤5次，浸泡时间为60秒
5、加酶：除空白对照孔外，每孔加酶结合物（1号液）100ul（2滴）。震荡均匀，置37度避光反应30分钟。按步骤4洗板并扣干
6、显色：每孔加显色剂A（3号液）和显色剂B（4号液）各50ul（1滴），震荡混匀，置37度避光显色10分钟。
7、测定：每孔加终止液50ul（1滴），震荡混匀后在450nm波长（630nm）读数。